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临床微生物实验室中假体关节的处理及培养 [复制链接]

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骨关节感染广义上讲是细菌、真菌、分枝杆菌或病*感染关节内滑膜或关节周围组织所引起的感染性疾病,临床上常见疾病为感染性关节炎。人工关节置换术能够明显改善关节活动性,恢复关节基本功能,提高患者生活质量。目前,人工关节置换术已经普及并广泛应用,尤其是人工髋、膝关节置换术。

假体关节感染(prostheticjointinfection,PJI)是人工关节置换术后的严重并发症之一,目前PJI发生率在1%左右。

假体关节感染(PJI)病原学

▲关节假体

导致发生PJI最为常见的微生物是凝固酶阴性葡萄球菌(30%-43%)和金*色葡萄球菌(12-23%),其次是混合菌(10%-11%)、链球菌(9%-10%)和革兰阴性杆菌(3%-6%)、肠球菌(3%-7%)和厌氧菌(2%-4%)。同时,也有11%左右的患者PJI中微生物培养为阴性。

在某些低*力微生物导致的感染中,比如凝固酶阴性葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌等,患者临床证据并不明显,同时上述微生物又是人体皮肤表面或特定部位定植微生物,有时可能被认为是污染菌。

所以,可结合实验室的一些关键指标证明PJI的真实性。如:一份以上送检样本的阳性(多份样本的送检);培养出微生物的时长(微生物的生长时长);标本直接涂片染色阳性(重视直接涂片镜检)。这些可帮助解释PJI的微生物结果。

目前主要认为PJI相关微生物的致病机制主要与生物膜(biofilm)的形成有关。微生物在假体表面生物膜形成后,密度增大,发生功能的异质性改变,使其能躲避宿主的免疫反应和常规抗菌药物的杀伤作用。而实现生物膜内病原菌的检测是需要采用超声波处理措施的。

▲生物膜的形成(来自参考文献2)

根据感染的发生时间PJI可分为早期急性感染(关节置换术后3个月内)、中期感染(关节置换术后3-24个月)和长期慢性感染(关节置换术后24个月以外)。

早期感染主要表现为急性假体关节部位的红肿热痛以及炎性渗出,多由*力较强的微生物所引起(如金*色葡萄球菌和革兰阴性杆菌),常有明显的蜂窝织炎和窦道形成。

中期感染临床症状较轻,常伴有假体关节松动或疼痛,较难与临床常见的无菌性松动区分。通常引起此类感染的是低*力微生物(如凝固酶阴性的葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌)。

早期感染和中期感染多是与假体植入这一过程有关,而长期感染则与血行感染有关。

假体关节感染(PJI)中微生物样本送检要求

可送检样本类型

关节液培养:可无菌采集后注入血培养瓶以提高培养阳性率;

假体关节:无菌容器送检至微生物室,行超声处理后培养;

假体周围组织:无菌容器送检至微生物室。

假体关节检验项目

需氧菌培养

厌氧菌培养

涂片镜检(包含真菌)

临床微生物实验室实现假体关节超声处理

临床在无法保留假体,手术取出时,可无菌送检至临床微生物室行病原学检测。

假体关节超声处理

将ml左右无菌生理盐水加入盛放假体的容器中,使得生理盐水完全浸没假体。使用普通涡旋仪,在室温下将容器涡旋30秒,使假体与无菌生理盐水有更好的接触。放入超声仪,超声(40kHz)5分钟。再次重复涡旋步骤。

▲超声波清洗仪

超声后液体处理

需氧培养:

①将超声后的0.5ml液体接种于血平板和巧克力平板,做定量培养(35℃,5%CO2,5天);每天观察是否生长,若定量培养>5个菌落,则根据菌落特征及相关操作规程进行鉴定和药敏。

②10ml超声后液体接种需氧血培养瓶(35℃,14天)。血培养瓶则待仪器报警后立即处理,转种培养后按照血培养操作规程进行鉴定和药敏。同时

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